計數(shù)顯色培養(yǎng)基的用法及用量說明
計數(shù)顯色培養(yǎng)基是一類利用微生物自身代謝產(chǎn)生的酶與相應顯色底物反應顯色的原理來檢測微生物的新型培養(yǎng)基。它是一種新型分離培養(yǎng)基,利用顯色培養(yǎng)基進行微生物的篩選分離,其反應的靈敏度和特異性大大優(yōu)于傳統(tǒng)培養(yǎng)基。這些相應的顯色底物是由產(chǎn)色基因和微生物部分可代謝物質(zhì)組成,在特異性酶作用下,游離出產(chǎn)色基因顯示一定顏色,直接觀察菌落顏色即可對菌種作出鑒定。
計數(shù)顯色培養(yǎng)基復蘇菌種前應準各適于該菌種生長的固體、液體培養(yǎng)基和培養(yǎng)設備,所有操作均應在符合生物安全保護及無菌條件下進行。啟開菌種宜采用鋸開法(鋸開前用75%酒精棉消毒菌種管外壁)。用吸管將液體培養(yǎng)基0.3ml左右注入被啟開的菌種安瓶中并吹打,使安瓶中的凍干菌種溶解成菌懸液。
將上述菌懸液全部吸出,分別接種到固體斜面和液體培養(yǎng)管中,一般放置在37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18~24小時。對需要特殊培養(yǎng)條件的細菌,如需5%~10%CO2或厭氧條件等,應分別于CO2培養(yǎng)箱或厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
計數(shù)顯色培養(yǎng)基用法:
稱取本品23.5克,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,冷卻至45-50℃待用;
傾注法:
取適當稀釋度的樣品液1ml加入無菌平皿中,再加入冷卻好的計數(shù)顯色培養(yǎng)基約15ml,混合均勻,待培養(yǎng)基*凝固后,36℃培養(yǎng)24~48h進行計數(shù);
涂布法:
取冷卻至45-50℃培養(yǎng)基,傾入無菌平皿,待培養(yǎng)基*凝固后,在36℃的培養(yǎng)箱中倒置放置1-2小時,加入適當稀釋度的樣品液1ml,涂布于培養(yǎng)基上,36℃培養(yǎng)24~48h進行計數(shù)。
操作步驟:
1、按國家標準、SN標準、FDA標準或其它方法制備樣品液;
2、取樣品液1ml加入冷卻至45-50℃顯色培養(yǎng)基中混勻或涂布于平板上;
3、36℃培養(yǎng)24~48h,選用有30~200個菌落的平板,計數(shù)顯色培養(yǎng)基的計數(shù)平板上出現(xiàn)的紅色菌落(不論其大小和顏色深淺均計數(shù))。